Eνότητα Εργασίας 1 (ΕΕ1)
Στην ΕΕ1 θα χρησιμοποιηθούν B2m-NOG ποντίκια με σοβαρή ανοσοανεπάρκεια ως αποδέκτες μεταμόσχευσης ανθρώπινων μονοπύρηνων κυττάρων περιφερικού αίματος (PBMC) έτσι ώστε να δημιουργηθούν “ανθρωποποιημένα” ποντίκια ως προς το ανοσοποιητικό τους σύστημα. Αρχικά, θα αναλύσουμε τα γονίδια των ασθενών με υποτροπιάζουσα- διαλείπουσα σκλήρυνση κατά πλάκας (ΣΚΠ) που εξετάστηκαν στην κλινική ΣΚΠ του Αιγινήτειου Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου και θα συγκεντρώσουμε για τη μελέτη ασθενείς όπως επίσης και υγιή άτομα που φέρουν το DRBI*1501 γονίδιο προδιάθεσης για ΣΚΠ του ανθρώπινου μείζονος συμπλέγματος ιστοσυμβατότητος, αφού πρώτα λάβουμε τη γραπτή συγκατάθεσή τους. Θα απομονώσουμε PBMC από φρέσκα δείγματα αίματος ασθενών και υγιών ατόμων, θα ταυτοποιήσουμε τους πληθυσμούς του ανοσοποιητικού συστήματος με κυτταρομετρία ροής και θα χρησιμοποιήσουμε τα κύτταρα για να τα μεταμοσχεύσουμε σε ομάδες B2m-NOG ποντικών. H ενσωμάτωση των ανθρώπινων κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος στα μεταμοσχευμένα ποντίκια θα ελέγχεται σε δείγματα αίματος των ποντικών στη διάρκεια του χρόνου χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής.
Eνότητα Εργασίας 2 (ΕΕ2)
Στην ΕΕ2, θα μεταφέρουμε PBMC από DRB1*1501-θετικούς ασθενείς με υποτροπιάζουσα-διαλείπουσα ΣΚΠ και DRB1*1501-θετικούς υγιείς δότες σε B2m-NOG ποντίκια. Πριν τη μεταμόσχευση θα επιλέξουμε προσεκτικά τους ασθενείς δότες με υποτροπιάζουσα-διαλείπουσα ΣΚΠ από την ομάδα μας με βάση τα ακόλουθα τρία βασικά κριτήρια: 1) εκείνους που έχουν μια πολύ ενεργή νόσο και βρίσκονται σε έξαρση, 2) εκείνους που φέρουν τον DRB1*1501 γονότυπο, 3) εκείνους που έχουν έξαρση της ασθένειας κατά τη διάρκεια θεραπείας με Tysabri, που παγιδεύει τα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος στο αίμα. Οι ομάδες των ποντικών που δέχτηκαν το μόσχευμα θα υποδιαιρεθούν περεταίρω σε ποντίκια που θα αφεθούν να αναπτύξουν οποιαδήποτε συμπτώματα αυθόρμητης ασθένειας (spontaneous sDR2.MS model) και σε ποντίκια που θα ανοσοποιηθούν για την επαγωγή πειραματικής αυτοάνοσης εγκεφαλομυελίτιδας (ΠΑΕ), έτσι ώστε να μπορεί να ανιχνευτεί τροποποιημένη ευαισθησία στην πειραματική απομυελίνωση (inducible iDR2.MS model). Όλα τα ποντίκια θα ελέγχονται καθημερινά για την εμφάνιση νευρολογικών ή μη- νευρολογικών συμπτωμάτων, με προσοχή να ανιχνευτούν σημάδια ασθένειας μοσχεύματος έναντι του ξενιστή, και για το βαθμό της ενσωμάτωσης του ανθρώπινου ανοσοποιητικού συστήματος χρησιμοποιώντας δείγματα αίματος και κυτταρομετρία ροής. Επίσης, θα πραγματοποιούνται νευροπαθολογικές αναλύσεις όταν τα ζώα θα θυσιάζονται στο τέλος του πειράματος.
Eνότητα Εργασίας 3 (ΕΕ3)
Στην ΕΕ3, θα συνθέσουμε και θα ταυτοποιήσουμε στείρα πεπτιδικά ανάλογα με βάση τους επιτόπους των πρωτεϊνών της μυελίνης που χρησιμοποιούνται στην ΠΑΕ. Επίσης πεπτιδικά ανάλογα θα συζευχθούν με τον πολυσακχαρίτη μαννάνη. Η ΒΙΑΝΕΞ θα συνθέσει το ELMog, το νέο ανοσοθεραπευτικό υπό έρευνα προιόν που έχει αναπτυχθεί από την ομάδα μας.
Eνότητα Εργασίας 4 (ΕΕ4)
Στην ΕΕ4, σκοπεύουμε να προσδιορίσουμε τους ακριβείς ανοσολογικούς μηχανισμούς με τους οποίους πεπτίδια μυελίνης συζευγμένα με την οξειδωμένη μαννάνη (ΟΜ), όπως το ELMog, προστατεύουν τα ποντίκια από την πειραματική απομυελίνωση. Το ELMog επάγει ισχυρή αντιγονοειδική ανοσολογική ανοχή, αλλά ο μηχανισμός δράσης του δεν είναι ακόμη γνωστός. Συγκεκριμένα, θα διερευνήσουμε εάν τα OM-πεπτίδια επάγουν Τ κυτταρική ανέργια, η οποία είναι ένας μηχανισμός με τον οποίο είναι γνωστό ότι τα αντιγονοειδικά Τ κύτταρα απενεργοποιούνται. Θα διερευνήσουμε ακόμα, κατά πόσο τα ΟΜ-πεπτίδια επάγουν ανοσολογική ανοχή μέσω της επαγωγής των μυελοειδών κατασταλτικών κυττάρων (MDSCs), που προέρχονται από τον μυελό των οστών. Τα MDSC αυξάνονται στο αίμα και στα λεμφικά όργανα κάτω από συνθήκες φλεγμονής, αυτοανοσίας και καρκίνου, και έχουν ανοσοκατασταλτικές ιδιότητες σε μοντέλα καρκίνου και ΠΑΕ. Επιπλέον θα διερευνηθούν ήδη αναγνωρισμένοι ανοσολογικοί μηχανισμοί περαιτέρω χρησιμοποιώντας καινοτόμες μεθοδολογίες για να προσδιοριστεί η μοριακή (με αλληλούχιση RNA μεμονωμένου κυττάρου) και η κυτταρική (με υπό συνθήκες γονιδιακή στόχευση) βάση της προστασίας του ELMog στα ποντίκια. Εν τέλει, επιδιώκουμε να αποδείξουμε την ορθότητα της ιδέας ότι τα ανθρωποποιημένα ποντίκια που δημιουργήθηκαν σε αυτό το ερευνητικό έργο αντιπροσωπεύουν βελτιωμένα μοντέλα ποντικιών για την σκλήρυνση κατά πλάκας, δοκιμάζοντας πρώτον ένα φάρμακο το οποίο έχει ήδη εγκριθεί για χρήση στην ανθρώπινη πολλαπλή σκλήρυνση, στην οποία στοχεύει και αδρανοποιεί τα Β κύτταρα (Ocrelizumab) και δεύτερον ένα πειραματικό φάρμακο που στοχεύει επιλεκτικά τα ειδικά ως προς τη μυελίνη Τ κύτταρα (ELMog) και έχει δώσει ενθαρρυντικά προ-κλινικά αποτελέσματα σε μοντέλο της ΠΑΕ, σε αγρίου τύπου και ανθρωποποιημένα HLA-DR2 διαγονιδιακά ποντίκια.
Eνότητα Εργασίας 5 (ΕΕ5)
Στην ΕΕ5 θα εκπονηθεί Μελέτη Τεχνικής Σκοπιμότητας, η οποία αποσκοπεί στην αξιολόγηση και την ανάλυση του δυναμικού του έργου. Μέσω της καταγραφής των πλεονεκτημάτων, των αδυναμιών, των ευκαιριών και των απειλών του έργου, θα προσδιοριστούν οι στρατηγικές εκείνες που θα εξασφαλίσουν τη βιωσιμότητα των αποτελεσμάτων του προγράμματος μετά την ολοκλήρωσή του. Με αυτόν τον τρόπο θα υποστηριχθεί η διαδικασία λήψης αποφάσεων της σύμπραξης. Τέλος, βάσει των δεδομένων που θα εξαχθούν από την ως άνω μελέτη, θα εκπονηθεί Επιχειρηματικό Σχέδιο, το οποίο θα κατευθύνει το εγχείρημα της αξιοποίησης των ερευνητικών προϊόντων.